产品货号：
KFS327
中文名称：
Brdu细胞增殖检测试剂盒(IHC法)
英文名称：
BrdU cell proliferation Detection Kit(IHC)
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒细胞增殖检测通过检测BrdU的掺合程度，监测细胞健康程度，估量DNA合成从而监测细胞分裂。
BrdU(溴脱氧尿苷，5-溴代-2'-脱氧尿苷)是一种合成的核苷酸即胸苷的类似物。BrdU通常被用于检测活组织中再生的细胞。BrdU可以掺合到复制细胞中新的合成DNA中（在细胞周期S期），在DNA复制可代替胸苷。利用抗BrdU的特异性抗体便可以用于检测这个插入的化学品，从而检测出细胞是否在复制其DNA。
保存：2～8℃，避光，有效期半年。
附表1.DAB显色液配制表：
相关搜索：Brdu细胞增殖检测试剂盒(IHC法)，细胞增殖检测试剂盒，BrdU cell proliferation Detection Kit(IHC)
BrdU(溴脱氧尿苷，5-溴代-2'-脱氧尿苷)是一种合成的核苷酸即胸苷的类似物。BrdU通常被用于检测活组织中再生的细胞。BrdU可以掺合到复制细胞中新的合成DNA中（在细胞周期S期），在DNA复制可代替胸苷。利用抗BrdU的特异性抗体便可以用于检测这个插入的化学品，从而检测出细胞是否在复制其DNA。
| 组分 | 规格 |
| 小鼠抗人BrdU antibody | 50μL |
| 即用型HRP标记羊抗鼠IgG | 3mL |
| 即用型山羊血清封闭液 | 3mL |
| 抗体稀释液 | 5mL |
| 10×过氧化氢溶液 | 600μL |
| 浓缩显色液A | 150μL |
| 浓缩显色液B | 150μL |
| 浓缩显色液C | 150μL |
保存：2～8℃，避光，有效期半年。
- 本试剂盒所用一级抗体为小鼠抗人、大小鼠及兔抗体，除可以用于人来源的组织样本检测之外，还可用于大鼠、小鼠及兔来源的样本。
- BrdU是光敏型，所以必须在黑暗中加入。细胞加了BrdU以后也可能光敏感，因此也在黑暗中培养。加入
- BrdU的时间和浓度根据细胞的类型和复制时间来确定，范围在15分钟到2个小时，浓度从10μM到100μM。例如，处理鼠胚胎成纤维细胞为30μM处理60min。
- 仪器：
微量移液器、低速离心机、平板摇床、微量移液器、光学显微镜、1.5m L Micro-tube - 试剂：
4%多聚甲醛、PBS、二甲苯、乙醇、苏木素染液、BSA、封片胶、Na2B4O7
- 0.1M四硼酸钠(NaB4O7),pH8.5。
- 梯度酒精溶液：50%～70%80%～90%～95%～100%。
- BrdU (5-溴代-脱氧尿苷)（sigma,KGA326）。
- 0.1% Trition X-100：0.05mL Trition X-100加到9.95mL ddH2O中。
- 0.5% Tween-20/1%BSA/PBS：0.05mL Tween-20,0.1g BSA溶于9.95mL PBS。
- BrdU在PBS中储存液pH7.4 or ddH2O，过滤器(MW = 307.1，20mM = 0.006g/ml)。
- 在最适的环境下培养细胞(细胞密度在临界对数生长期)加入BrdU至终浓度为30μM，孵育30～60min。
- 除去BrdU用PBS洗3次。
- 4%多聚甲醛室温固定30min。用PBS洗3次。
- 2N HCL，室温反应15min。
- 0.5% Tween-20/1%BSA/PBS洗3次，3min/次。
- 加入与HCL等体积的0.1M NaB4O3室温反应15min，以0.5% Tween-20/1%BSA/PBS完全洗净。
- 滴加0.1% Triton X-100溶液，冰上处理1～2min。
- 用PBS稀释10X的过氧化氢至1X，100μL/片室温反应5min,PBS洗三次。
- 即用型山羊血清封闭液封片，37度封闭45～60min，100μL/片，洗三次。
- 100μL抗体稀释液稀释BrdU单抗，加一抗反应（1：100），37℃120min（或4℃过夜）。阴性对照只加PBS或血清，PBS洗3次，3min/次。
- 每片滴加50μL即用型HRP标记羊抗鼠IgG，37℃反应60min。PBS洗3次，3min/次。
- 配制相应用量的DAB显色液（见附表1）。滴加显色液，室温显色5～10min后PBS洗净。
- 苏木素衬染5～10min，流水洗净，1%盐酸酒精分化10 s。
- 切片经梯度酒精和二甲苯脱水，风干后，中性树胶封片。
- 在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
附表1.DAB显色液配制表：
| 切片数（张） | 浓缩显色液A | 浓缩显色液B | 浓缩显色液C | 蒸馏水 |
| 1 | 2.5μL | 2.5μL | 2.5μL | 50μL |
| 2 | 5μL | 5μL | 5μL | 100μL |
| 3 | 7.5μL | 7.5μL | 7.5μL | 150μL |
| 4 | 10μL | 10μL | 10μL | 200μL |
| 5 | 12.5μL | 12.5μL | 12.5μL | 250μL |
| 6 | 15μL | 15μL | 15μL | 300μL |
| 7 | 17.5μL | 17.5μL | 17.5μL | 350μL |
| 8 | 20μL | 20μL | 20μL | 400μL |
| 9 | 22.5μL | 22.5μL | 22.5μL | 450μL |
| 10 | 25μL | 25μL | 25μL | 500μL |
| 20 | 50μL | 50μL | 50μL | 1mL |
| 30 | 75μL | 75μL | 75μL | 1.5mL |
| 40 | 100μL | 100μL | 100μL | 2mL |
| 50 | 125μL | 125μL | 125μL | 2.5mL |
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